1    酶抑制研究的重要性

药物代谢的主要场所是肝脏，其中细胞色素 P450（CYP）酶为主要的代谢酶，其亚型 CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、 CYP3A4参与了体内80%以上的药物代谢。CYP酶是一个多功能的酶系，在体内具有可诱导性和可抑制性。该酶与药物的相互作用能够在所有的体内过程（包括吸收、分布、代谢和排泄）中发生，其中以代谢过程最为突出，约占40%。

近年发现，药物相互作用是临床上产生严重不良反应甚至死亡的主要原因之一。CYP参与的药物相互作用主要包括两种类型：酶抑制（enzyme inhibition）和酶诱导（enzyme induction）。酶抑制是指某些化合物能抑制肝脏药物代谢酶的活性，导致联合用药时一些药物代谢减慢，使得药物的血药浓度上升致毒性；酶诱导是指某些化合物能提高肝脏药物代谢酶的活性，导致合同的药物代谢速率加快，使得原药的血药浓度下降，使其疗效降低或丧失。

2.2 试剂盒优势

便捷——本试剂盒省去了肝微粒体制备和试剂配制时间，可以直接使用，大大缩短了实验周期。

准确——本试剂盒各成分均经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性高。

稳定——本试剂盒稳定性强、易于运输和保存。

2.3 试剂盒组成

2.4 参考使用方法

2.4.1 试验组

1）冰浴融化试剂盒各组分，置于冰上待用；

2）除微粒体外，将孵育体系其它各组分按照配比混合并吹吸混匀，于37℃预孵育5min；

3）将以上混合液195μL/管分装至2.0mL离心管中，于37℃水浴中保温， 5μL/反应加入肝微粒体，吹吸3次混匀于37℃水浴条件下启动代谢反应，使用秒表计时；

4）于设定孵育时间点，向孵育体系中加入终止液终止反应（如预冷乙腈，预冷乙腈体积：孵育体系体积=1:1）。

例：200μL孵育体系配制：

注：

a.体系中有机溶剂加入量不得大于1%；

b.若实际需要n个孵育体系，则需配置n＋1个体系；

c.本实验需设置系列受试物浓度，通常为0μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L；

d.参考使用方法仅为使用范例，需根据实际试验需求进行调整。

2.4.2对照组：

无A、B液组：反应体系中不加A液和B液，其它组分加入量不变，缺少体积用0.1M PBS缓冲液补齐。

2.4.3结果计算：

用各特异性探针底物的代谢物的生成速率反映微粒体孵育体系中各CYP450亚型酶的活性；设定只含代谢底物的孵育体系中各亚型酶活性为100%，作为对照；样品中代谢物生成速率相对于对照组生成速率的百分比，作为各亚型酶的剩余活性。

活性剩余百分比 = (某浓度样品底物代谢物生成速率/零浓度样品代谢物生成速率) × 100%

2.4.4使用注意事项：

1）试验开始前，请自行准备2.0mL离心管、不同规格枪头、37℃水浴锅等；

2）本产品仅供科研使用，不能用于人体及动物的治疗或临床诊断；

3）使用前，需于冰浴条件下解冻并混合均匀；

4）于-70℃冰箱冷冻保存，切勿反复冻融；

5）在使用过程中，也可根据实际实验需求调整试剂盒使用方法和各组分的加入量；

6）因CYP2B6和CYP2C19在体外没有绝对特异的抑制剂可用，故结果分析还需结合其它结果进行，如重组酶法的结果。

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