1    概述

1.1 药物代谢研究简介

药物代谢研究是创新药物研发的重要内容，它不仅决定了创新药物制剂研发的成败，而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而，药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用，研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。

药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广，加上代谢转化的器官和酶系的多样性，使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低，代谢产物的检测具有一定的困难。体外代谢法在短时间内可以得到大量的代谢产物，且代谢条件可控，代谢体系比较“干净”，代谢物易于分离、提取，有利于代谢途径研究及代谢产物结果的确定等，因而，体外代谢法具有突出的优越性。

由于肝脏是药物代谢的主要场所，体外代谢模型多以肝脏为基础。目前，研究体外代谢方法主要有：肝微粒体体外温孵法、重组P450酶体外温孵法、肝细胞体外温孵法、肝脏离体灌流法和肝切片法。其中，肝微粒体体外温孵法与其他体外代谢方法相比，酶制备简单，代谢过程快，重现性好，易大量操作，同时可用于药物代谢酶的抑制及体外清除等方面的研究，因而在实际工作中应用较为普遍。

1.2 CYP450酶代谢表型研究的重要性

药物代谢酶表型鉴定，主要是研究参与药物清除的代谢酶的类型、数量和相对贡献率。如果药物主要通过单一的代谢途径对药物进行清除，可能会存在很大的用药风险；相反，如果某一药物的代谢过程涉及的代谢酶越多，则说明其代谢途径也越多，也就难以发生潜在的药物-药物相互作用，使得患者之间的治疗偏差降低。因此，在新药临床前研究中，对药物的代谢酶表型进行鉴定，获得其主要代谢酶的消除比例，阐明参与药物体内代谢转化的相关酶亚型，对于研究药物的代谢机制，预测药物代谢多态性和药物间相互作用等方面具有重要意义。

1.3 CYP450酶及代谢表型研究方法

CYP450为一类含亚铁血红素蛋白的超家族，根据相关酶亚型在药物代谢中的重要程度，可将CYP450分为以下三类：（1）主要CYP450，包括CYP1A2、CYP2C9 、CYP2C19 、CYP2D6 和CYP3A4；（2）较主要CYP450，包括CYP2B6、CYP2C8和CYP3A5；（3）次要CYP450，包括CYP1A1、CYP1B1、CYP2A6、CYP2E1、CYP2J2和CYP4A11等。参与药物代谢的动物肝微粒体P450酶较为复杂，而人肝微粒体中参与药物代谢的P450酶相对比较简单，主要有CYP1A、CYP2C、CYP2D、CYP2E和CYP3A，其组成见图1。

图3 大鼠肝微粒中某药物的代谢抑制率

图4 犬肝微粒中某药物的代谢抑制率

4.2 试剂盒优势

便捷——本试剂盒省去了肝微粒体制备和试剂配制时间，可以直接使用，大大缩短了实验周期。

准确——本试剂盒各成分均经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性高。

稳定——本试剂盒稳定性强、易于运输和保存。

4.3 产品组成

50反应/盒，200μL/反应。

4.4 产品使用说明

4.4.1 试验组

1）冰浴融化试剂盒各组分，置于冰上待用；

2）除微粒体外，将孵育体系其它各组分按照配比混合并吹吸混匀，于37℃预孵育5min；

3）将以上混合液195μL/管分装至2.0mL离心管中，于37℃水浴中保温， 5μL/反应加入肝微粒体，吹吸3次混匀于37℃水浴条件下启动代谢反应，使用秒表计时；

4）于设定孵育时间点，向孵育体系中加入终止液终止反应（如预冷乙腈，预冷乙腈体积：孵育体系体积=1:1）。

例：200μL孵育体系配制：

注：

a.体系中有机溶剂加入量不得大于1%；

b.若实际需要n个孵育体系，则需配置n＋1个体系。

4.4.2对照组：

1）阳性底物组：反应体系中不加选择性抑制剂，并将受试物换为阳性底物，其它组分加入量不变，缺少体积用0.1M PBS缓冲液补齐；

2）无抑制剂组：反应体系中不加选择性抑制剂，其它组分加入量不变，缺少体积用0.1M PBS缓冲液补齐；

无A、B液组：反应体系中不加A液和B液，其它组分加入量不变，缺少体积用0.1M PBS缓冲液补齐。

4.4.3结果计算：

采用底物消除法评价试验结果，用待测物的消除速率表示待测物在微粒体孵育体系中的代谢速率；

抑制率%=（1-加入抑制剂样品代谢速率/无抑制剂组样品代谢速率）×100%

4.5 使用注意事项

1）试验开始前，请自行准备2.0mL离心管、不同规格枪头、37℃水浴锅等；

2）本产品仅供科研使用，不能用于人体及动物的治疗或临床诊断；

3）使用前，需于冰浴条件下解冻并混合均匀；

4）于-70℃冰箱冷冻保存，切勿反复冻融；

5）在使用过程中，也可根据实际实验需求调整试剂盒使用方法和各组分的加入量；

6）因CYP2B6和CYP2C19在体外没有绝对特异的抑制剂可用，故结果分析还需结合其它结果进行，如重组酶法的结果。

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